พิพิธภัณฑสถานแห่งชาติ อู่ทอง ตั้งอยู่ริมคูเมืองอู่ทอง ถนนมาลัยแมน อำเภออู่ทอง จังหวัดสุพรรณบุรี มีพื้นที่ 25 ไร่ อยู่ใกล้กับที่ว่าการอำเภออู่ทอง ห่างจากตัวจังหวัดสุพรรณบุรีประมาณ 30 กิโลเมตร สมเด็จพระเจ้าบรมวงศ์เธอกรมพระยาดำรงราชานุภาพ ได้เสด็จทอดพระเนตรเมืองโบราณท้าวอู่ทองเมื่อ พ.ศ. 2446 พบว่าเป็นเมืองโบราณรุ่นเดียวกับนครปฐม ต่อมาพระบาทสมเด็จพระมงกุฎเกล้าเจ้าอยู่หัว ได้เสด็จทอดพระเนตรเมืองโบราณอู่ทองในปี พ.ศ. 2456 และโอนงานให้กรมศิลปากรดูแลรับผิดชอบ ประกาศขึ้นทะเบียนเป็นโบราณสถานของชาติเมื่อวันที่ 8 มีนาคม พ.ศ. 2478 จึงได้สร้างอาคารพิพิธภัณฑสถานแห่งชาติ อู่ทอง ขึ้นชั่วคราวในปี พ.ศ. 2500 ทำการสำรวจขุดแต่งโบราณสถานในปี พ.ศ. 2504 ได้พบสถูปเจดีย์และโบราณวัตถุสมัยทวารวดีจำนวนมาก ต่อมาได้สร้างพิพิธภัณฑสถานแห่งชาติ อู่ทอง อย่างถาวรในปี พ.ศ. 2508 เพื่อจัดแสดงโบราณวัตถุที่พบดังกล่าว พระบาทสมเด็จพระเจ้าอยู่หัวฯ รัชกาลที่ 9 พร้อมด้วยสมเด็จพระนางเจ้าฯ พระบรมราชินีนาถ ได้เสด็จพระราชดำเนินทรงเปิดพิพิธภัณฑสถานแห่งชาติ อู่ทอง เมื่อวันที่ 13 พฤษภาคม พ.ศ. 2509